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LZCap® AG(3'Acm)
- 产品货号:HN3004

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产品描述:LZCap® AG (3'Acm)是一种Cap1类似物,可以作为mRNA共转录加帽试剂,在T7聚合酶作用下,利用LZCap® AG (3'Acm)、NTPs以及模板DNA共转录产生带5’端Cap 1结构的mRNA,加帽后的mRNA能直接在细胞和体内翻译表达。广泛应用于体外转录、基因编辑、疫苗研发、肿瘤CAR-T治疗、蛋白代替疗法以及再生医学等领域。

LZCap® AG (3'Acm)需要T7启动子以AG作为起始序列,LZCap® AG (3'Acm)的加帽率可达97%,1μg起始模板量转录产生100-200μg mRNA。

分子式:C35H48N16O24P4(游离酸)

分子量:1200.75(游离酸)

CAS号:/

浓  度:100 mM

规  格:100 μL/支、1 mL/支

纯  度:HPLC ≥95%

盐  型:NH4+

结  构

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保存:-20°C及以下保存。


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     为了进一步降低mRNA的免疫原性,365体育亚洲官方入口-app下载还可以为您提供修饰核苷酸N1-Me-pUTP(N1-甲基假尿苷三磷酸)(货号:HN1002)用来代替UTP参与转录反应。

          备注:

1)     LZCap® AG (3'Acm)适用于以5’AG 3’起始序列的T7启动子转录载体,在载体构建时需要加以考虑。

2)     实验所用的试剂耗材和容器等无RNase污染。

3)     建议使用线性化的DNA模板进行转录。

4)     使用修饰核苷酸代替野生型核苷酸时,反应终浓度不变。

5)     若使用PCR产物作为转录起始模板,DNA模板量可以减少一半。

3. 将配置好的反应液混匀,短暂离心后,置于37℃孵育2-3小时。若转录本长度小于 100nt,增加反应时间至 4-8 h。

转录产量

荧光素酶基因作为DNA模板,体外转录后,通过琼脂糖电泳和NanoDrop分光光度计检测荧光素酶mRNA的完整性和产量。LZCap® AG封顶的mRNA产量高达200μg,每个标准IVT反应的DNA模板为1μg。

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细胞表达

转录所得包含luciferase基因的mRNA转染293T细胞,检测荧光值,判断mRNA的翻译表达情况。检测结果显示LZCap® AG(3'Acm)加帽的mRNA细胞表达是市售Cap 1类似物的2-3倍。


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RNase 检测

  RNase检测基于高度敏感和特异的RNase探针底物,它与活性RNase反应并释放荧光。在阳性对照中检测到表明存在RNase的荧光。在LZCap®样品中没有检测到荧光,表明没有RNase污染。

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加帽率检测

共转录加帽后的mRNA样品用RNaseH进行处理,纯化后上LC-MS检测加帽率,LZCap加帽率≥97%。

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细胞毒性检测

高浓度2μM(常规实验的~700倍)的帽子类似物对293T体现出4-18%的毒性率、对Huh-7体现出2-12%的毒性率,而在较低的浓度下则无法检测到细胞毒性。LZCap® AG(3'Acm)安全性与市售Cap 1类似物相当。

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